黄 色 成 年人在线-黄 色 大 片 网站-黄 色 毛片免费-黄aaa-黄a大片-黄a大片av永久免费

您好!歡迎訪問上海喆圖科學(xué)儀器有限公司網(wǎng)站!
全國(guó)服務(wù)咨詢熱線:

400-001-0304

當(dāng)前位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 關(guān)于細(xì)胞劃痕法的詳細(xì)介紹

關(guān)于細(xì)胞劃痕法的詳細(xì)介紹

更新時(shí)間:2024-03-25  |  點(diǎn)擊率:719

細(xì)胞劃痕(wound healing)法是簡(jiǎn)捷測(cè)定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)和修復(fù)能力的方法。
一、原理
在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上,用微量槍頭或其它硬物在細(xì)胞生長(zhǎng)的中央?yún)^(qū)域劃線,去除中央部分的細(xì)胞,然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間,取出細(xì)胞培養(yǎng)板,在顯微鏡下觀察并拍照記錄特定位置細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移能力。
通過不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)修復(fù)能力的不同,可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力的差別。
二、步驟
1、準(zhǔn)備:
所有能滅菌的器械都要滅菌,直尺和 marker 筆在操作前紫外照射 30 min(超凈臺(tái)內(nèi))
2、流程:
1. 培養(yǎng)板劃線:先用 marker 筆在 6 孔板背后,用直尺比著,均勻得劃?rùn)M線,大約每隔 0.5~1 cm 一道,橫穿過孔,每孔至少穿過 5 條線;
2. 鋪細(xì)胞:在孔中加入約 5×105 個(gè)細(xì)胞,具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同,掌握為過夜能鋪滿;
3. 細(xì)胞劃線:第二天用槍頭比著直尺,盡量垂至于背后的橫線劃痕,槍頭要垂直,不能傾斜;
4. 洗細(xì)胞:用 PBS 洗細(xì)胞 3 次,去除劃下的細(xì)胞,加入無血清培養(yǎng)基;
5. 細(xì)胞培養(yǎng)及觀察:放入 37℃、5% 二氧化碳培養(yǎng)箱,培養(yǎng);按 0,6,12,24 小時(shí)取樣,倒置顯微鏡觀察特定位置細(xì)胞遷移情況并拍照;
6. 結(jié)果分析:使用 Image J 軟件打開圖片后,隨機(jī)劃取 6-8 條水平線,計(jì)算細(xì)胞間距離的均值。
三、注意事項(xiàng)
1、鋪細(xì)胞最好使用 6 孔板,因?yàn)?6 孔板可以保證有相當(dāng)距離的平直劃痕,而且因?yàn)橛?5 條定位線,與劃痕相交,這樣就有10 個(gè)可固定監(jiān)測(cè)點(diǎn),不作重復(fù),誤差也很小。
2、如果你連續(xù)監(jiān)測(cè) 24 小時(shí),你需要考慮到劃痕縮小是細(xì)胞遷移和細(xì)胞繁殖共同作用的結(jié)果,而不是單純的細(xì)胞遷移。
如果你要單純的考慮細(xì)胞遷移,你可以先用(1 ug/ml)處理一小時(shí),抑制細(xì)胞的分裂,這樣你的結(jié)果就是細(xì)胞遷移的作用了。另外,使用無血清培養(yǎng)基也可以降低增殖對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
3、照片拍完之后,可以用 ImageJ 來測(cè)量劃痕區(qū)域的像素定量比較細(xì)胞遷移的速度。
4、雖然無血清培養(yǎng)可以忽略細(xì)胞增殖的影響,但是由于細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)整體性的下調(diào)節(jié),細(xì)胞遷移的速度也會(huì)慢很多。
5、應(yīng)盡量清洗掉散落的細(xì)胞,對(duì)于一些細(xì)胞,低血清濃度下也能重新貼壁并增殖,此外也影響數(shù)據(jù)美觀。
四、常見問題
1.劃痕法測(cè)量適用的細(xì)胞范圍較小,一般只適用于上皮細(xì)胞,纖維樣細(xì)胞。
2.雖然無血清培養(yǎng)可以忽略細(xì)胞增殖的影響,但是由于細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)整體性的下調(diào)節(jié),細(xì)胞遷移的速度也會(huì)慢很多。
3、在用 PBS 緩沖液沖洗時(shí),注意貼壁慢慢加入,以免沖散單層貼壁細(xì)胞,影響實(shí)驗(yàn)拍照結(jié)果。
4、一般做劃痕實(shí)驗(yàn),需要排除細(xì)胞增殖的影響,一般在不影響細(xì)胞增殖的情況下采用低血清(<2%)或者無血清,否則細(xì)胞增殖就不能忽略,這樣對(duì)于遷移較慢的細(xì)胞就需要延長(zhǎng)拍攝時(shí)間(也可用絲裂酶處理一小時(shí))。
5、按照 6 孔板背后畫線的垂直方向劃痕,可以形成若干交叉點(diǎn),作為固定的檢測(cè)點(diǎn),以解決了前后觀察時(shí)位置不固定的問題。
6、每次拍照前、后,盡量換掉培養(yǎng)基,去除飄落的細(xì)胞,能得到較為干凈的劃痕區(qū)域。

cm10 (1).png


掃一掃,添加微信
地址:上海張江醫(yī)療器械產(chǎn)業(yè)基地(瑞慶路528號(hào)) 傳真:
©2025 上海喆圖科學(xué)儀器有限公司 版權(quán)所有 All Rights Reserved.  備案號(hào):滬ICP備14016230號(hào)-3
主站蜘蛛池模板: 7777精品伊人久久久大香线蕉| 国产美女亚洲精品久久久久久| 欧美啪| 91视频国产精品| 日韩毛片在线| 真91视频| 久青草国产手机在线视频| 天天天干干干| 97久久精品人人做人人爽| 国产小网站| 久久久久久久国产免费看| 青草伊人久久| 天天干天天爽| 亚洲综合春色另类久久| 99热在这里只有免费精品| 国产一区二区高清| 久久乐国产精品亚洲综合m3u8| 奇米视频777| 四虎影视永久地址www成人污 | 天天插天天操天天干| 亚洲综合精品成人| 98色花堂国产精品首页| 国产精品视频久久久久| 久久er99热这里只是精品| 欧美日韩免费在线观看| 四虎官方影库| 亚洲精品乱码久久久久蜜桃| 中文亚洲字幕| 99色精品| 国产成人精品日本亚洲直接| 农村女人十八毛片a级毛片| 日本二区在线观看| 色综合天天综久久久噜噜噜久久〔 | jiz欧美高清| 精品日韩在线观看| 免费网站成人亚洲| 日本不卡一区二区| 搜一级毛片| 亚洲欧美高清在线| 99re免费视频精品全部| 国产日韩欧美自拍|